Kõrgtäpse instrumendina võib HPLC kergesti põhjustada mõningaid tülikaid väikesi probleeme, kui seda kasutamise ajal ei kasutata õigesti.Üks levinumaid probleeme on veeru tihendamise probleem.Kuidas kiiresti vigase kromatograafi tõrkeotsingut teha.HPLC süsteem koosneb peamiselt reservuaaripudelist, pumbast, injektorist, kolonnist, kolonni temperatuurikambrist, detektorist ja andmetöötlussüsteemist.Kogu süsteemi jaoks on tugisambad, pumbad ja detektorid peamised komponendid ja peamised asukohad, millel on probleeme.
Kolonni rõhu võti on ala, mis vajab HPLC kasutamisel suurt tähelepanu.Kolonni rõhu stabiilsus on tihedalt seotud kromatograafilise piigi kuju, kolonni efektiivsuse, eraldusefektiivsuse ja retentsiooniajaga.Kolonni rõhu stabiilsus ei tähenda, et rõhu väärtus on stabiilse väärtuse juures stabiilne, vaid pigem seda, et rõhu kõikumise vahemik on vahemikus 345 kPa või 50 PSI (võimaldab kasutada gradientelueerimist, kui kolonni rõhk on stabiilne ja muutub aeglaselt).Liiga kõrge või liiga madal rõhk on kolonni rõhu probleem.
HPLC rikete ja lahenduste suhtes kõige altid
1, kõrge rõhk on HPLC kasutamisel kõige levinum probleem.See tähendab järsku rõhu tõusu.Üldiselt on põhjused järgmised: (1) Üldiselt on selle põhjuseks voolukanali ummistus.Siinkohal peaksime seda tükkhaaval uurima.a.Kõigepealt lõigake vaakumpumba sisselaskeava ära.Sel hetkel täideti PEEK-toru vedelikuga nii, et PEEK-toru oli lahustipudelist väiksem, et näha, kas vedelik tilgub suvaliselt.Kui vedelik ei tilgu või tilgub aeglaselt, on lahustifiltri pea ummistunud.Töötlemine: Leota pool tundi 30% lämmastikhappes ja loputa ülipuhta veega.Kui vedelik tilgub juhuslikult, on lahustifiltri pea normaalne ja seda kontrollitakse;b.Avage puhastusventiil nii, et liikuv faas ei läbiks kolonni, ja kui rõhku oluliselt ei vähendata, on filtri valge pea blokeeritud.Töötlemine: filtreeritud valgepead eemaldati ja ultraheliga töödeldi 10% isopropanooliga pool tundi.Eeldades, et rõhk langeb alla 100 PSI, on filtreeritud valge pea normaalne ja seda kontrollitakse;c.Eemaldage kolonni väljapääsu ots, kui rõhk ei vähene, on kolonn blokeeritud.Ravi: Kui tegemist on puhversoola ummistusega, loputage 95%, kuni rõhk on normaalne.Kui takistuse põhjustab mõni paremini säilinud materjal, tuleks normaalrõhu poole kihutamiseks kasutada praegusest liikuvast faasist tugevamat voolu.Kui pikaajaline puhastusrõhk ülaltoodud meetodil ei vähene, võib kolonni sisse- ja väljalaskeava lugeda instrumendiga ühendatuks ja kolonni saab puhastada liikuva faasiga.Praegu, kui kolonni rõhku ei vähendata, saab kolonni sisenemissõela plaati ainult asendada, kuid kui toiming ei ole hea, on lihtne kolonni efekti vähendada, seega proovige kasutada vähem.Raskete probleemide korral võib kaaluda veeru väljavahetamist.
(2) Vale voolukiiruse seadistus: õige voolukiiruse saab lähtestada.
(3) Vale voolusuhe: voolude erinevate proportsioonide viskoossusindeks on erinev ja ka suurema viskoossusega voolu vastav süsteemirõhk on suurem.Võimaluse korral võib madalama viskoossusega lahustid asendada või uuesti seadistada ja ette valmistada.
(4) Süsteemi rõhu nulli triiv: reguleerige vedeliku tasemeanduri nulli.
2, liiga madal rõhk (1) on tavaliselt põhjustatud süsteemi lekkest.Mida teha? Otsige üles iga ühendus, eriti samba mõlemas otsas asuv liides, ja pingutage lekkeala.Eemaldage post ja pingutage või vooderdage PTFE kile sobiva jõuga.
(2) Gaas siseneb pumpa, kuid rõhk on sel ajal tavaliselt ebastabiilne, kõrge ja madal.Tõsisemalt öeldes ei suuda pump vedelikku absorbeerida.Töötlemismeetod: avage puhastusventiil ja puhastage voolukiirusel 3–5 ml/min.Kui ei, siis aspireeriti õhumullid väljalaskeklapist spetsiaalse nõelatoru abil.
(3) Mobiilfaasi väljavool puudub: kontrollige, kas reservuaaripudelis on liikuv faas, kas kraanikauss on liikuvasse faasi sukeldatud ja kas pump töötab.
(4) Võrdlusklapp ei ole suletud: võrdlusventiil suletakse pärast aeglustumist.Tavaliselt langeb see 0,1-ni.~ 0,2 ml/min pärast võrdlusklapi sulgemist.
Kokkuvõte:
Selles artiklis analüüsitakse ainult vedelikkromatograafias levinud probleeme.Loomulikult puutume oma praktilise rakendusega kokku rohkem muid probleeme.Vea käsitlemisel peaksime järgima järgmisi põhimõtteid: hüpoteetilise teguri ja probleemi vahelise seose kindlaksmääramiseks muutke korraga ainult ühte tegurit;Üldjuhul peaksime tõrkeotsingu jaoks osade asendamisel tähelepanu pöörama lammutatud tervete osade tagasi panemisele, et vältida raiskamist;Hea salvestamisharjumuse kujundamine on veakäsitluse edu võti.Kokkuvõtteks võib öelda, et HPLC kasutamisel on oluline pöörata tähelepanu proovide eeltöötlusele ning seadmete nõuetekohasele tööle ja hooldusele.
Postitusaeg: 18. september 2023