Rekombinantsetel valguantigeenidel on sageli mitu erinevat epitoopi, millest osa on järjestuse epitoobid ja osa struktuursed epitoobid.Loomade denatureeritud antigeenidega immuniseerimisel saadud polüklonaalsed antikehad on üksikute epitoopide suhtes spetsiifiliste antikehade segud ja neid saab üldiselt kasutada looduslike struktuuride või denatureeritud sihtvalkude tuvastamiseks.Denatureeritud valkude immunogeenidena kasutamise kõrvalkasu seisneb selles, et denatureeritud valgud kipuvad olema immunogeensemad ja võivad stimuleerida loomadel tugevat immuunvastust.
Escherichia coli ekspressioonisüsteem valitakse tavaliselt antigeensetel eesmärkidel, kuna see on aja ja raha poolest kõige kulukam süsteem.Selleks, et parandada sihtvalgu ekspressiooni võimalust ja puhastamise mugavust, ekspresseeritakse mõnikord ainult väikest sihtvalgu fragmenti, näiteks spetsiifilist domeeni.
Valkude kolmemõõtmeline struktuur
Valgu spetsiifiline domeen
Kui antikeha valmistamise eesmärk on ainult vereloome tuvastamine, on ökonoomne ja kiire kasutada antigeenina sünteetilist väikepeptiidi, kuid peptiidi segmendi sobimatu valiku tõttu on oht nõrga immunogeensuse või mitteregeensuse tekkeks.Kuna antikeha valmistamine nõuab pikka perioodi, valitakse katse edukuse tagamiseks polüpeptiidantigeeni kasutades antikehade valmistamiseks sageli kaks või kolm erinevat peptiidi segmenti.
Polüpeptiidantigeeni puhtus immuniseerimiseks peab olema üle 80%.Kuigi teoreetiliselt võib kõrgema puhtusega antikehi saada parema spetsiifilisusega, toodavad loomad praktikas alati suure hulga mittespetsiifilisi antikehi, varjates nii antigeeni puhtuse eeliseid.
Lisaks peab antikehade valmistamine väikestest peptiididest olema ristseotud sobiva kandjaantigeeniga, et suurendada selle immunogeensust.Kaks levinumat antigeenset kandjat on KLH ja BSA.
Postitusaeg: 23. märts 2023