Bioloogilistes uuringutes kasutatakse tavaliselt pika järjestusega polüpeptiide.Peptiidide puhul, mille järjestuses on rohkem kui 60 aminohapet, kasutatakse nende saamiseks tavaliselt geeniekspressiooni ja SDS-PAGE.See meetod võtab aga kaua aega ja lõpptoote eraldamise efekt ei ole hea.
Pika peptiidi sünteesi väljakutsed ja lahendused
Pikkade peptiidide sünteesil seisame alati silmitsi probleemiga, st kondensatsioonireaktsiooni steeriline takistus suureneb koos järjestuse suurenemisega sünteesis ja reaktsiooni kulgemiseks on vaja kohandada reaktsiooniaega.Kuid mida pikem on reaktsiooniaeg, seda rohkem tekib kõrvaltoimeid ja moodustub osa sihtmärkpeptiidist.Sellised jäägid – puudulikud peptiidahelad on peptiidide pika sünteesi käigus tekkivad peamised lisandid.Seetõttu on pika peptiidi sünteesil põhiprobleem, millest peame üle saama, uurida kvaliteetseid reaktsioonitingimusi ja reaktsioonimeetodeid, et muuta aminohapete kondensatsioonireaktsioon terviklikumaks ja täielikumaks.Lisaks vähenda reaktsiooniaega, sest mida pikem on reaktsiooniaeg, seda rohkem on kontrollimatuid kõrvalreaktsioone, seda keerulisemad on kõrvalsaadused.Seetõttu võetakse kokku järgmised kolm punkti:
Mikrolaineahjus sünteesi saab kasutada: Mõnede sünteesiprotsessis esinevate aminohapete puhul, mida ei ole lihtne integreerida, võib kasutada mikrolainesünteesi.Sellel meetodil on märkimisväärsed tulemused ja see vähendab oluliselt reaktsiooniaega ja vähendab kahe peamise kõrvalsaaduse moodustumist.
Kasutada võib fragmentide sünteesi meetodit: Kui mõnda peptiide on tavaliste sünteesimeetoditega raske sünteesida ja neid ei ole lihtne puhastada, saame peptiidi teatud segmendis mitme aminohappe kogu kondensatsiooni peptiidahelaks tervikuna üle võtta.See meetod võib lahendada ka paljusid sünteesi probleeme.
Võib kasutada atsüülhüdrasiidi sünteesi: peptiidide atsüülhüdrasiidi süntees on N-terminaalse Cys peptiidi ja C-terminaalse polüpeptiidhüdrasiidi tahke faasi sünteesi meetod. Peptiidsideme meetodi saavutamiseks toimub keemiline selektiivne reaktsioon amiidsidemete moodustumise vahel.Tuginedes Cys positsioonile peptiidahelas, jagab see meetod kogu peptiidahela mitmeks järjestuseks ja sünteesib need vastavalt.Lõpuks saadakse sihtpeptiid vedela faasi kondensatsioonireaktsiooni kaudu.See meetod mitte ainult ei vähenda oluliselt pika peptiidi sünteesiaega, vaid suurendab oluliselt ka lõpptoote puhtust.
Pikk peptiidide puhastamine
Pikkade peptiidide eripära põhjustab paratamatult toorpeptiidide keerulisi komponente.Seetõttu on väljakutseks ka pikkade peptiidide puhastamine HPLC abil.amüloidi seeria polüpeptiidide puhastusprotsess, mis neelab palju kogemusi ja mida kasutatakse edukalt pikkade peptiidide puhastamisel.Uute seadmete kasutuselevõtmise, mitme puhastussüsteemi segamise, korduva eraldamise ja muude kogemusmeetodite abil paranes pika peptiidide puhastamise edukus oluliselt.
Postitusaeg: 18. aprill 2023